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CD45RA抗體試劑是針對CD45RA蛋白開發(fā)的單克隆或多克隆抗體,用于檢測該蛋白在細(xì)胞或組織中的表達(dá)。CD45RA是CD45(白細(xì)胞共同抗原,Leukocyte Common Antigen, LCA)的剪接異構(gòu)體,屬于受體型酪氨酸磷酸酶(PTP)家族,廣泛表達(dá)于造血細(xì)胞(如T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等),但在紅細(xì)胞和血小板中不表達(dá)。
功能定位:CD45RA主要作為免疫細(xì)胞分群的標(biāo)志物:
原始T細(xì)胞(Na?ve T cells):CD45RA+的T細(xì)胞未接觸過抗原,處于靜息狀態(tài)。
B細(xì)胞及淋巴瘤:CD45RA高表達(dá)于正常B細(xì)胞及部分B細(xì)胞淋巴瘤(如濾泡性淋巴瘤)。
免疫信號調(diào)控:通過調(diào)節(jié)Src家族激酶活性,影響T/B細(xì)胞受體信號傳導(dǎo)、細(xì)胞存活及凋亡。
二、分子特性1. 分子量與結(jié)構(gòu)分子量:CD45RA的分子量為205-220 kDa(糖基化后),具體差異由外顯子剪接和翻譯后修飾決定。
結(jié)構(gòu)特征:
外顯子剪接:CD45基因(PTPRC)包含A、B、C三個可變外顯子,通過差異剪接生成不同異構(gòu)體。CD45RA包含外顯子A(ABC或BC剪接形式),而CD45RO則不含A外顯子。
跨膜結(jié)構(gòu)域:由單鏈I型糖蛋白構(gòu)成,含高度保守的胞內(nèi)酪氨酸磷酸酶結(jié)構(gòu)域,胞外區(qū)因剪接不同而具有可變性。
2. 基因與蛋白信息基因名稱:PTPRC(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type C),Entrez Gene ID:5788,UniProt ID:P08575。
蛋白別名:包括CD45抗原、L-CA(白細(xì)胞共抗原)、B220(小鼠中B細(xì)胞標(biāo)志)等。
3. 表達(dá)特征細(xì)胞類型特異性:
細(xì)胞類型 | CD45RA表達(dá)水平 | 生物學(xué)意義 |
---|---|---|
原始T細(xì)胞(CD4+/CD8+) | 高表達(dá) | 未接觸抗原,處于靜息狀態(tài) |
記憶T細(xì)胞(CD45RO+) | 不表達(dá) | 與CD45RA互補(bǔ)定義T細(xì)胞亞群 |
B細(xì)胞及淋巴瘤 | 高表達(dá)(>90% B細(xì)胞淋巴瘤) | 用于B細(xì)胞腫瘤鑒別診斷 |
單核細(xì)胞 | 部分表達(dá) | 功能尚未完全明確 |
信號調(diào)控:
通過去磷酸化激活 Src家族激酶(如Lck、Fyn) ,增強(qiáng)T細(xì)胞受體(TCR)和B細(xì)胞受體(BCR)信號傳導(dǎo)。
抑制JAK激酶活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞因子受體信號通路。
細(xì)胞生存與凋亡:
通過整合素信號通路促進(jìn)細(xì)胞存活。
在凋亡過程中參與DNA碎片化。
三、CD45RA抗體的應(yīng)用特性1. 抗體克隆與特異性常用克?。篔S-83(eBioscience)、MEM-56(Invitrogen)、4KB5(基因科技)、HI100(BioLegend)等。
特異性驗證:需通過Western blot、流式細(xì)胞術(shù)或免疫組化確認(rèn)與CD45RA的ABC/BC剪接形式結(jié)合,而非其他CD45異構(gòu)體(如CD45RO)。
2. 實驗優(yōu)化要點流式細(xì)胞術(shù):推薦使用APC-Cy7或PE-Cy7熒光染料,避免藍(lán)色染料(如CF?405S)因低熒光強(qiáng)度導(dǎo)致背景干擾。
免疫組化(IHC) :需高pH熱修復(fù)(如pH9.0 EDTA緩沖液)以暴露抗原表位,陽性對照建議使用扁桃體或淋巴結(jié)組織。
四、相關(guān)疾病與臨床意義免疫缺陷:CD45功能障礙與 嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID) 相關(guān)。
腫瘤診斷:CD45RA+多見于B細(xì)胞淋巴瘤,而CD45RO+常見于T細(xì)胞淋巴瘤,聯(lián)用CD45RA/CD45RO抗體可輔助鑒別。
感染與炎癥:CD45RA表達(dá)變化與丙型肝炎病毒(HCV)感染及慢性炎癥狀態(tài)相關(guān)。
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